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News有了這些資料，使用DAB染色液會更輕松
更新時間：2022-10-28 點擊次數：584次
DAB染色液運用還原態無色亞甲藍則在病變細胞內Fe2+強烈催化下，迅速被細胞內廣泛存在的活性氧氧化，變為有色的氧化態亞甲基藍。目前，DAB染色液用于免疫組化染色，應用在Dako自動染色系統上。
原理：細胞顆粒中的過氧化物酶，能將過氧化氫中的氧釋放出來，氧化二氨基聯苯胺，形成金黃色沉淀而定位于過氧化物酶活性的部位。
DAB染色液的使用方法：
1.DAB顯色液配制：10mM Tris-HCl(pH7.6)9mL +DAB(diaminobezidin3，3-二氨基聯苯胺)+0.3%(W/V)NiCl2 或CoCl2 1mL，顯色時加入5-10mL 30%H2O2混勻后立即使用；
2.顯色：準備好含有待測蛋白的固相膜：包括電泳、轉印、封阻、一抗處理、辣根過氧化酶（HRP）標記的二抗（或鏈霉親和素）處理、清洗等步驟；
3.加入適量的DAB顯色液，鋪滿整個固相膜表面。
4.置于平式搖蕩儀上，在室溫下孵育2至5分 鐘，避免光照，直至棕褐色沉淀出現。
5.用鑷子夾起固相膜，放進無離子水里清洗。
6.空氣中晾干。
7.拍照記錄 。
DAB染色液的注意事項：
1.DAB溶液應低溫密封保存。如有結晶析出，應確保結晶溶解再行使用；
2.顯色工作液應現用現配，新鮮配制的工作液應為無色或淺棕色，如顏色過深，請勿使用；
3.DAB在常溫下不穩定，每次取用后均應及時加蓋密封放回冰箱，以免因DAB分解影響實驗，或因滲漏造成實驗環境污染；
4.DAB有潛在致突變作用，操作時應注意穿戴好防護用具。
